Смесители Esko: выбор для ванной из серий K4 и London и для умывальника Vienna и Moscow, однорычажный вариант Boston и Monaco, модель для кухни Nizza — инструкция по установке, чешский производитель сантехники

Популярный чешский концерн RAF выпустил линию малобюджетных смесителей Esko. Этот шаг позволил концерну закрепить свои позиции на рынке сантехнических изделий. Официальный сайт предоставляет полную информацию обо всем ассортименте предлагаемой продукции. Стоимость и качество смесителей крайне привлекательны для многих потребителей, данная продукция очень востребована.

До начала эксплуатации изделия необходимо выполнить определенное условие: установить фильтр с тонкой очисткой для того, чтобы смеситель не вышел из строя из-за присутствия различных частичек и примесей, находящихся в воде.

Особенности продукции

Комфортность эксплуатации продукции Esko заключена в том, что одно и то же изделие может устанавливаться на раковине и ванне. Предоставленный производителем разный дизайн изделий дает вам возможность подобрать ту модель, которая идеально впишется в ваш интерьер. Например, классический или винтажный смеситель зачастую становится главной изюминкой помещения. Помимо высоких эстетических характеристик, смесители Esko имеют приятные конструкционные дополнения, например, несколько модификаций подачи воды: капельная, массирующая и традиционная.

Продукция Esko произведена из прочного пластика или нержавеющего металла. Стоит напомнить, что пластиковая модель хоть и не так дорога, как металлическая, тем не менее срок эксплуатации у нее намного меньше.

Производитель за короткий промежуток времени успел получить множество положительных откликов о смесителях для ванн. Потребители отметили высокие качественные характеристики во время использования и радующий глаз дизайн, идеально вписывающийся в любой интерьер.

Ассортимент

Предлагаемый ассортимент условно делится на основные категории:

• по направлению – для кухонных или ванных помещений;
• по конфигурации: излив разной длины, с насадками для душа и без, наличие аэратора, жесткий или пластичный патрубок;
• по методам регулирования – однорычажный или двухвентильный;
• по декору – классический, винтажный или хай-тек;
• по цене – бюджетный, стандартный или люкс.

На выпущенные продукты из представленной предприятием RAF линейки установлен гарантийный срок от шести до двенадцати месяцев.

Изделие при помощи специальной пленки защищено от механических повреждений, возможных при транспортировке. Помимо смесителя, в комплекте находятся насадки, шланг для душа, прочие элементы крепления (крепежная планка, узелки для соединения, фиксатор для удобной установки).

Популярные модели

Для ванной комнаты

• London LD31. Множество положительных отзывов об этом продукте позволило обеспечить ему постоянную востребованность у потребителей. Надежное качество и современность дизайна, подкрепленные длительным гарантийным сроком, превратили London LD31 в лидера по продажам среди всех изделий линии смесителей Esko для ванных комнат. Дополнительные элементы: четырехсантиметровые керамические картриджи и аэратор, выполненные из силиконового материала Neoperl. Инновационная система самоочистки позволяет быстро избавиться от появляющегося налета.

Каучуковые подводящие патрубки в совокупности с высоким качеством латуни А-класса делают смеситель комфортным в эксплуатации. Корпус смесителя выполнен из латуни, покрытой хромовой и никелевой изолирующей пленкой для предотвращения возникновения коррозии. Аэратор помогает экономить расход воды и ко всему прочему выступает выравнивателем давления в кране. Установка данного смесителя не вызовет у вас трудностей.

Смеситель не требует дополнительных переходников и может быть расположен в любом комфортном для вас месте. Для этого производителем были изготовлены пластичный подводящий патрубок и специальные крепежные элементы.

• Vienna VN31-2. Относительно низкая стоимость на данную модель и несколько оригинальных свойств привлекли внимание потребителей. Комплектующие смесителя произведены из высококачественной латуни А-класса, которая покрыта изолирующим слоем из хромового и никелевого сплава. Излив имеет длину тридцать пять сантиметров. Смеситель обладает кран-буксой, укомплектован комфортными ручками управления, заранее обработан теплоизолирующим слоем.

Конструкционные свойства этой модели имеют ряд преимуществ: минимизация расхода воды, регулирование температуры и устранение риска внезапного разбрызгивания. Монтаж данного смесителя одинаково удобен как над раковиной, так и над ванной. Он не требователен в плане пространства и отлично вписывается в малогабаритные помещения.

• Vienna VN54-2. Бюджетный, но с высокими качественными характеристиками вариант. Смеситель также изготовлен из латуни с изолирующим слоем хрома и никеля. Ретро дизайн модели обязательно привлечет внимание почитателей старины. Отличительными характеристиками изделия являются комфортная ручка, которая защищена от перегревания, присутствие полимерных аэраторов Neoperl с функцией самоочищения, а также патрубок из каучука, который дополнен специальными закрепляющими гайками. Элегантность и изящность данной модели не оставят равнодушными настоящих ценителей прекрасного.

Среди популярных моделей можно также выделить K4, Moscow, Monaco, Nizza, Boston и Tallinn. На всю продукцию предоставляется гарантия для клиентов на несколько лет.

Линия предлагаемой продукции включает и душевые системы, которые также произведены из высококачественной латуни. Материал покрыт специальной защитной хромированной пленкой. Это позволяет защитить модели от коррозии и не допустить распространения бактерий.

Представленные душевые модели не имеют крана, они обеспечивают подачу воды непосредственно в душ. Данное технологическое решение связано с предотвращением возможной протечки, вызванной наличием большого количества стыков.

Из всей линейки можно выделить две основные модели.

• NewYorkNY83 – массивный и основательный смеситель с точными и строгими формами. Идеально подходит для интерьера в стиле хай-тек. Толстая стенка корпуса, керамический картридж около четырёх сантиметров длиной и пластичный подводящий каучуковый патрубок Sedal определили высокое качество и комфортность во время эксплуатации смесителя.
• Esko HHS130 – одна из немногих представленных моделей, имеющая возможность подбора дополнительных элементов, включая душевой шланг и держатель для душевой лейки.

Для кухни

Сантехнические изделия Esko, предполагающие использование на кухне, предлагают две отличающиеся друг от друга категории: двухвентильную и однорычажную. К выбору в пользу двухвентильных моделей часто склоняются потребители, оформляющие свой интерьер в стиле ретро.

Отличительные особенности смесителя для кухни от смесителя для ванной комнаты заключаются в более сильной подаче воды и внешнем оформлении. Для комфортного мытья посуды необходимо, чтобы вода поступала в центральную часть мойки. Большую роль в этом играет длина носика излива. Если носик расположен высоко, то вода будет динамично разбрызгиваться во все стороны.

Но при большом количестве посуды и крупных предметов кухонной утвари слишком низкий носик также будет доставлять неудобства. В связи с этим при покупке смесителя не забывайте учитывать и глубину вашей мойки.

Производитель позаботился о возможности поворачивания излива смесителя в обе стороны. Бюджетная модель рассчитана на сто двадцать-сто сорок градусов. Дорогостоящая модель рассчитана на поворот угла в сто восемьдесят градусов. Стоит помнить о том, что если вы планируете устанавливать смеситель на углу кухонного гарнитура, то преимущество смесителя разворачиваться на сто восемьдесят градусов оказывается невостребованным.

Смеситель сборного вида позволит вам быстро и просто заменить подверженный дефектам элемент. Литая модель, оснащенная поворачивающимся гусаком, не имеет швов на корпусной конструкции. Сборная модель способствует созданию единой конструкции из разных элементов. Но производитель утверждает, что литые модели обеспечены более высокими показателями герметичности, в то время как сборные аналоги характеризуются комфортным управлением подачи воды.

Основополагающей технической арактеристикой любой модели является длина излива смесительного носика. Концерн RAF для линейки смесителей Esko предоставил потребителям разнообразный ассортимент вариантов под любой вкус и предпочтения. Короткая длина излива носика изготовлена в границах ста пятидесяти-ста восьмидесяти миллиметров. Средняя длина носика изготовлена в границах двухсот-двухсот тридцати миллиметров. Удлиненный излив носика изготовлен в границах двухсот сорока-двухсот восьмидесяти миллиметров.

Рассмотрим популярные модели.

• Dublin DB519. Изготовлен в современном стиле, сочетает в себе высокую функциональность и удобство в эксплуатации. Данное изделие оснащено керамическими картриджами Kerox в три с половиной сантиметра и пластичным подводящим каучуковым кабелем Sedal. Установка рекомендована для раковины. Аэратор расположен под углом и чуть устремлен вперед, что обеспечивает легкость выполнения монтажных работ на раковинах разных размеров.
• London LD519. Отличный вариант для кухонной мойки, является поворотной моделью. Характеризуется повышенными функциональными качествами и невысокой стоимостью. Смеситель скомплектован с использованием керамического картриджа в четыре сантиметра и аэратора из силиконового материала Neoperl с самоочисткой, который предотвращает появление брызг и удаляет налет.
• Berlin BR519. Выполнен в стиле хай-тек привлекает внимание потребителей своими массивными и строгими линиями. Прочный корпус с прямыми контурами, имеющийся керамический картридж в три с половиной сантиметра и пластичный подводящий каучуковый кабель Sedal – главные особенности данной модели.

О том, как открутить аэратор со смесителя ESKO, смотрите в следующем видео.

цена, отзывы, фото, обзор, описание, характеристики, тесты, инструкция

Подробная таблица характеристик товара.

Отзывов на данную модификацию пока нет.

При использовании необходимо чётко следовать технике безопасности согласно паспорту изделия. Смеситель для кухни K4 Esko цвет хром — тесты не проводились. Следите за обзорами.

Смеситель для кухни Esko Kitchen K4

Все комплектации

По Минску

Курьер — завтра, 21 декабря

Самовывоз — сегодня, 20 декабря, бесплатно

По Беларуси

Курьер (Брест, Витебск, Гомель, Гродно и др. города) — 2-3 дня

Самовывоз — 24 декабря, бесплатно

Возврат и обмен

14 дней на обмен и возврат без лишних вопросов. Почитайте условия возврата

Способы оплаты

Наличный расчет
Безналичный расчет (с НДС)
Банковскими картами при доставке
Банковскими картами онлайн на сайте
Кредит или рассрочка без переплат

Описание

Смеситель из нержавеющей стали. Завышенная посадка, сменный пластиковый аэратор (наружная резьба), универсальный корпус подходит для установки как под правую так и под левую руку.

Страна производства: Россия
Импортер: ООО «ОП НИИ ПКД»

Характеристики

Тип

смеситель

Коллекция

Kitchen

Материал

нержавеющая сталь

Артикул

ФР-00012969

Назначение

для кухни

Механизм

однорычажный

Запорный клапан

керамический клапан

Тип подводки

гибкая

Тип крепления

гайка

Высота смесителя, см

35.1

Длина излива, см

21.6

Длина подводки, см

45

Страна производства

Россия

Информация о товаре предоставлена для ознакомления и не является публичной офертой. Производители оставляют за собой право изменять внешний вид, характеристики и комплектацию товара, предварительно не уведомляя продавцов и потребителей. Просим вас отнестись с пониманием к данному факту и заранее приносим извинения за возможные неточности в описании и фотографиях товара.

Смеситель для кухни Esko R-излив, хром (K4)

Данная информация о товаре предоставлена исключительно в целях ознакомления и не является публичной офертой. Наш интернет-магазин использует данные о товарах, представленные на официальных сайтах производителей и поставщиков, а также в документации к товару. Однако, производители оставляют за собой право изменять внешний вид, характеристики и комплектацию изделий, предварительно не уведомляя продавцов и потребителей. При совершении покупки, убедительная просьба, уточнять интересующие вас сведения о товаре до оформления заказа.

Смеситель из нержавеющей стали. Цвет покрытия : матовый никель. Корпус и излив штампованные, картридж 35 мм, завышенная посадка, сменный пластиковый аэратор (наружная резьба), гибкая подводка 35 см на 1/2, комплект креплений, ребро жесткости, универсальный корпус подходит для установки как под правую так и под левую руку.

Страна производства: Чехия

Производитель: ООО «Вода» наб. Обводного канала, д. 138, к. 1, литер В, пом. 3, ком. 207, г. Санкт-Петербург, РФ

Импортер: ООО «ОП НИИ ПКД» г. Минск,ул. Бехтерева, д.7, ком. 216

Смесители Esco — «Прежде чем покупать — прочтите этот отзыв и 10 раз подумайте»

Когда делали ремонт, были стеснены в средствах, поэтому выбирали бюджетные варианты во всем.

Когда пришли выбирать сантехнику, была хорошая акция на сантехнику ESCO, плюс консультант очень ее хвалил и нам очень понравился дизайн.

Итак, мы приобрели кран на кухню, для раковины и ванны, а также душевую систему. Помимо этого такая же сантехника у моей мамы, правда краны у нее с ручками, поэтому есть из чего делать выводы.

Плюсы:

1) красивый дизайн

2) демократичная цена

3) не текут

Минусы:

1) ужасная регулировка температуры воды!

Я настраиваю воду минут пять — то льется кипяток, то холодная вода. Особенно ужасно на кухне, где постоянно переключаю воду с теплой (для мытья посуды) на холодную (для набора воды). Ужасно раздражает,когда ради того чтобы что-нибудь секундно сполоснуть, ты вынужден пять минут тыркаться с водой, то обжигаясь, то наоборот замерзая…

Чуть лучше дела обстоят в ванной, где воду регулировать приходится не так часто. Включаешь — течет сначала холодная вода. Приходится ждать и пропускать ее, через несколько минут польется теплая. Хуже если хочешь сделать воду погорячее или похолоднее — будь готов быстро отпрыгнуть в душе когда польется кипяток.

2) ну и вообще мне кажется качество хромает. Через несколько месяцев на кране в ванной отвалилась наклейка красная, хотя ее никто не трогал, синяя еще держится. Сколько прослужит эта сантехника — не знаю.

Резюме

Сантехника на мой взгляд низкого эксплуатационного качества. Я не советую ее вам приобретать и если бы знала что столкнусь с такой проблемой — то никогда бы ее не купила, а разорилась бы на сантехнику подороже…

pH-зависимые и динамические взаимодействия цистатина C с гепарансульфатом

Cst-3 связывает гепарин и HS в зависимости от pH

Чтобы исследовать, является ли Cst-3 HS-связывающим белком, мы попытались экспрессировать как человеческий, так и мышиный Cst-3 в E.coli . В то время как большинство из экспрессируемых E.coli мышиного Cst-3 существовало в мономерной форме, весь очищенный рекомбинантный человеческий Cst-3 существовал в димерной форме. Поскольку известно, что димерная форма Cst-3 неактивна в качестве ингибитора протеаз ^7,8 , мы решили сосредоточить наше исследование на мономерной форме мышиного Cst-3.Сначала мы исследовали связывание рекомбинантного Cst-3 с гепарином с помощью гепарин-сефарозной хроматографии. При pH 7,1 Cst-3 не связывал колонку с гепарином и только появлялся в потоке. Однако, когда мы снизили pH работающих буферов до pH 6,5, 6 и 5,5, мы наблюдали прогрессивно более сильное связывание с гепарин-сефарозой (рис. 1a). Чтобы подтвердить этот результат, мы также очистили мышиный Cst-3 от сверхэкспрессии в клетках 293 и исследовали его связывание с гепарин-сефарозой. Из-за низкого уровня экспрессии Cst-3 в клетках 293 связывание Cst-3 с колонкой с гепарином исследовали с помощью вестерн-блоттинга.Как показано на фиг. 1b (и дополнительной фиг. 1), положение элюирования клеток 293, экспрессирующих Cst-3, было идентично положению элюирования E.coli , экспрессирующего Cst-3. Из-за гораздо большего выхода, E.coli , экспрессирующий Cst-3, использовали во всех следующих экспериментах.

a Связывание E.Coli экспрессированного мышиного Cst-3 с колонкой гепарин-сефароза при pH 5,5, 6 и 6,5. Пунктирная линия представляет градиент соли (в проводимости мСм / см). b Вестерн-блот-анализ фракций гепарин-сефарозной хроматографии клеток 293, экспрессирующих мышиный Cst-3. Белок загружали в колонку гепарин-сефароза при pH 5,5 и pH 6, и фракции объемом 1 мл собирали во время промывки и элюирования. ПК: положительный контроль. FT: протекать. c Связывание Cst-3 (10 мкг / мл) с клетками CHO-K1 определяли с помощью анализа связывания на основе FACS при pH 7,1 и pH 6,5. Связанный Cst-3 детектировали путем окрашивания козьим антителом против мышиного Cst-3 с последующим окрашиванием козьим IgG-Alexa647.Заштрихованная гистограмма относится к клеткам, окрашенным только первичными и вторичными антителами. d Связывание Cst-3 с клетками CHO-K1, предварительно обработанными гепаринлиазой III (HL-III) при pH 6,5. e Связывание Cst-3 с pgsE и pgsF, двумя линиями мутантных клеток СНО с измененными структурами HS.

Поскольку гепарин представляет собой высокосульфатированную форму HS, мы затем попытались определить, действительно ли Cst-3 связывает умеренно сульфатированный HS, экспрессируемый клетками CHO-K1, с использованием анализа связывания с клеточной поверхностью на основе проточной цитометрии.Интересно, что связывание Cst-3 с поверхностью клеток CHO-K1 также зависело от pH, не проявляя заметного связывания при pH 7,1; напротив, связывание наблюдали при pH 6,5 (рис. 1c). Как и ожидалось, предварительная обработка клеток CHO-K1 гепаринлиазой III полностью отменяла связывание, что позволяет предположить, что связывание Cst-3 с клеткой CHO-K1 при pH 6,5 строго зависит от HS (рис. 1d). Две мутантные клеточные линии СНО с измененным паттерном сульфатирования HS также тестировали на связывание Cst-3. Связывание Cst-3 с клетками pgsE было снижено на 70% по сравнению с его связыванием с клетками CHO-K1 (рис.1д). Поскольку клетки pgsE имеют ~ 50% снижение общего сульфатирования ¹⁴ , наш результат предполагает, что для связывания Cst-3 требуется минимальный уровень сульфатирования HS. Напротив, связывание Cst-3 с клетками pgsF было сравнимо с его связыванием с клетками CHO-K1 (рис. 1e). Поскольку клетки pgsF специфически лишены 2-O-сульфатирования, но поддерживают такой же уровень общего сульфатирования, как клетки CHO-K1 ¹⁵ , этот результат предполагает, что 2-O-сульфатирование является незаменимым для взаимодействия Cst-3 / HS.

Чтобы изучить взаимодействие гепарина с Cst-3 более подробно, мы выполнили анализ поверхностного плазмонного резонанса (SPR) связывания между Cst-3 и иммобилизованным гепарином при различных значениях pH.Наши результаты показали, что Cst-3 взаимодействовал с гепарином при K _D 0,6 мкМ и 1,8 мкМ при pH 5,5 и pH 6,5, соответственно (рис. 2a и b, таблица 1). Этот результат согласуется с нашим анализом связывания гепарин-сефоразы, в котором мы наблюдали, что для элюирования Cst-3 из колонки с гепарином при pH 5,5 требуется более высокая концентрация соли, чем при pH 6,5 (рис. 1).

Сенсограммы SPR связывания Cst-3 с иммобилизованным гепарином при pH 6.5 ( a ) и pH 5,5 ( b ). Обратите внимание, хотя кривая SPR выглядела похожей, самая низкая концентрация Cst-3, используемая при pH 5,5, вдвое меньше, чем при pH 6,5 (312,5 нМ против 625 нМ). Черные кривые — это кривые, рассчитанные с использованием BIAevaluate 4.0.1.

Анализ HS олигосахарида на микрочипе взаимодействия Cst-3-HS

Чтобы понять структурные требования HS для взаимодействия с Cst-3, мы выполнили анализ HS олигосахарида на микрочипе.Матрица олигосахаридов HS содержит 52 олигосахарида HS с определенной структурой с различной длиной, уровнями сульфатирования и типами сульфатирования (рис. 3a и 3b). Из анализа микроматрицы очевидно, что гексасахарида достаточно для связывания Cst-3 (олиго № 16, 34 и 40). Более длинные олигосахариды, такие как олиго № 41, № 20 и № 27, не показали лучшего связывания с Cst-3 по сравнению с гексасахаридом № 34; следовательно, гексасахарида достаточно, чтобы занять сайты связывания HS Cst-3. Интересно, что мы обнаружили, что авидность связывания между Cst-3 и HS строго не коррелировала с общим уровнем сульфатирования HS, что необычно для HS-связывающих белков.Например, гептасахариды, содержащие 4 и 5 сульфатных групп (олиго № 6 и № 7, соответственно), могут уже достаточно хорошо взаимодействовать с Cst-3, в то время как гептасахариды, содержащие 7 и 8 сульфатных групп (№ 5 и № 10, а также № 4 и № 26, соответственно), показали аналогичные или даже более низкие сигналы связывания по сравнению с олиго №6 и №7. Для гептасахаридов, по-видимому, для связывания с Cst-3 требуются по крайней мере 4 сульфатные группы, поскольку гептасахариды с тремя сульфатными группами (№ 9, № 12 и № 53) показали минимальное связывание.Наконец, оказывается, что ни 6-O-сульфатирование, ни 2-O-сульфатирование строго не требуется для связывания, потому что олиго, лишенные любой из этих двух модификаций, показали аналогичное связывание с Cst-3 (олиго №6 и №8).

a Список всех 52 олигосахаридов с определенной структурой, иммобилизованных на чипе микрочипа. b Microarray зондировали 10 мкг / мл Cst-3 при pH 5,5, и связанный Cst-3 окрашивали биотинилированным козьим антителом против мышиного Cst-3, а затем авидином, конъюгированным с Alexaflour-488.Строили усредненную интенсивность флуоресценции. Полоса ошибок соответствует S.D. 36 индивидуальных пятен для каждого олигосахарида. Исходные данные микрочипа включены в качестве дополнительных данных 1.

Структурный анализ взаимодействия цистатина C – HS с помощью ЯМР

Для определения потенциального HS-связывающего сайта цистатина C мы выполнили ¹ H, ¹⁵ N –HSQC ЯМР эксперименты путем титрования гексасахарида HS (олиго № 34 на микрочипе HS, рис. 3a) в Cst-3 при pH 5,5. Из спектров HSQC мы наблюдали HS-зависимый химический сдвиг ряда остатков (рис.4а). После того, как пики HSQC были отнесены с помощью экспериментов с трехмерным тройным резонансом (дополнительный рис. 2), мы обнаружили, что наибольшее возмущение химического сдвига (CSP) было в N-концевой области (от K4 до E14) (рис. 4b и 4c). Кроме того, в области между Q88 и C97 также наблюдался значительный CSP при титровании гексасахаридом. Чтобы еще раз подтвердить этот результат, мы провели эксперимент HSQC, титруя цистатин С гепарином. Опять же, мы обнаружили выраженный CSP в N-концевой области и в области между Q88 и C97 (дополнительный рис.3). Этот результат предполагает, что остатки, расположенные в этих двух областях, напрямую взаимодействуют с HS.

a HSQC-спектры Cst-3 при его титровании молярным соотношением Cst-3: гексахарид от 1: 1 до 1: 9 при pH 5,5. b ¹⁵ График возмущения N-химического сдвига для всех остатков. c ¹ График изменения H-химического сдвига для всех остатков.

Мутагенез HS-связывающего сайта Cst-3

Чтобы определить точный HS-связывающий сайт Cst-3, мы выполнили сайт-направленный мутагенез ряда положительно заряженных остатков. Основываясь на данных ЯМР, мы сначала сосредоточились на основных остатках, расположенных на N-конце (K4 и R8) и между Q88 и C97 (H90, R93 и K94). Попытки получить мутанты K4A и R8A не увенчались успехом, поскольку мутации привели к чрезвычайно плохой растворимости рекомбинантных белков. Чтобы решить эту проблему, мы попытались вместо этого экспрессировать укороченную по N-концу форму Cst-3 (∆N-Cst-3), лишенную N-концевого декапептида Ser1-Val10.При нанесении на колонку с гепарином при pH 5,5 ∆N-Cst-3 выделялся во время промывки колонки (150 мМ NaCl, таблица 2), что позволяет предположить, что N-концевые остатки действительно необходимы для связывания HS. Затем мы исследовали, участвуют ли H90, R93 и K94 в связывании с HS. Три дополнительных основных остатка, H86, R70 и K75, также были включены в исследование мутагенеза из-за их непосредственной пространственной близости к H90, R93 и K94. Мы обнаружили, что мутанты H90A и R93Q-K94Q элюировались из колонки с гепарином во время промывки колонки (таблица 2), что позволяет предположить, что эти три остатка, вероятно, непосредственно участвуют в связывании HS.Кроме того, мутант R70A также показал снижение концентрации соли, необходимой для элюирования, на 50 мМ, что указывает на то, что R70 также участвует в связывании HS (таблица 2). Напротив, позиции элюирования K75A и H86A были почти идентичны позициям WT, что указывает на то, что эти два остатка не участвуют в связывании с HS (таблица 2). Следует отметить, что все идентифицированные HS-связывающие остатки консервативны между мышиным и человеческим Cst-3 (дополнительная фигура 4). Чтобы подтвердить, что мутации не оказали отрицательного влияния на структурную целостность Cst-3, мы протестировали активность Cst-3 в отношении папаина и обнаружили, что, за исключением мутанта ∆N-Cst-3, ингибирующая активность все остальные мутанты были интактными (дополнительный рис.5). Поскольку известно, что N-концевые пептиды непосредственно участвуют в ингибировании ¹⁶ , мы полагаем, что структурная целостность ∆N-Cst-3 не была нарушена, учитывая тот факт, что он все еще сохранял ~ 20% ингибирующей активности по сравнению с диким типа Cst-3 (дополнительный рис. 5).

Затем мы использовали анализ связывания с клеточной поверхностью, чтобы определить, действительно ли идентифицированные остатки участвуют в связывании HS в клеточных условиях.Мы обнаружили, что мутанты ∆N-Cst-3, H90A, R93Q-R94Q и R70A показали существенное снижение связывания с клеточной поверхностью CHO-K1 по сравнению с таковым WT Cst-3 (рис. 5a – c). Результаты подтвердили, что эти остатки действительно участвуют в связывании Cst-3 с HS.

Связывание мутантов ∆N-Cst-3 ( a ), H90A и R93Q-K94Q ( b ) и R70A ( c ) с клетками CHO-K1 определяли с помощью FACS. Все белки использовали в концентрации 30 мкг / мл, и связанный Cst-3 определяли с помощью козьих антител против мышиного Cst-3, а затем с помощью антител против козьих IgG – Alexa647.

Дальнейшее понимание структуры было получено путем анализа наших данных в контексте имеющихся кристаллических и ЯМР структур мономерного Cst-3 ^17,18 . Наши данные предполагают, что R70, H90, R93 и K94, а также N-концевые остатки участвуют в связывании HS. В кристаллической структуре R70, H90, R93 и K94 образуют кластер основных остатков (рис. 6a), который обычно находится в сайтах связывания HS большинства HS-связывающих белков ^12,19 . Однако во всех кристаллических структурах человеческого Cst-3 N-концевые остатки ¹ SSPGKPPRLVG ¹¹ отсутствовали из-за высокодинамичной природы сегмента.Действительно, в структурах ЯМР человеческого Cst-3, опубликованных в 2020 году, было обнаружено, что N-концевой сегмент очень гибкий и может принимать множество различных конформаций (рис. 6b). ¹⁷ Интересно, что некоторые из этих конформаций могут приводить к N -конце довольно близко к кластеру основных остатков H90 (рис. 6а). Связывание гепарина и / или HS с Cst-3, вероятно, выбирает эти конформации и сдвигает конформационное равновесие в сторону образования полного сайта связывания HS, состоящего из двух половин: основного кластера H90 и N-концевого кластера, включая основные остатки. K4 (K5 в человеческой последовательности) и R8, а также положительно заряженный N-концевой амин.Основываясь на этой конкретной конформации N-концевого пептида, мы рассчитали, что длинная ось предполагаемого сайта связывания HS составляет 31 Å (между H90 и R8). Поскольку типичная длина гексасахарида HS составляет около 27 Å, гексасахарид должен иметь достаточную длину, чтобы занять предполагаемый сайт связывания HS. Мы также ожидаем конформационного изменения в Cst-3 при связывании HS, особенно на N-конце и рядом с ним, что может дополнительно укорачивать сайт связывания HS в Cst-3, чтобы соответствовать гексасахариду.

Лента Cst-3 была окрашена на основе возмущения химического сдвига ЯМР (CSP) при титровании HS олигосахарида. Положительно заряженные остатки на N-конце и рядом с H90 показаны в модели розовой палочки, включая A1 (с заряженной аминогруппой на N-конце), K4, R8, R51, R70, H90, R93 и K94. Эта структура была получена путем моделирования гомологии модели 2 структуры ЯМР человеческого Cst-3 (PDB: 6RPV).b Ансамбль структуры ЯМР полноразмерного мономерного человеческого Cst-3 (PDB: 6RPV), демонстрирующий гибкость N-конца и области вокруг H90.

Предложенная ориентация связывания HS показала, что другой основной остаток, R51, также может участвовать в связывании HS, потому что его боковая цепь непосредственно обращена к предполагаемому сайту связывания HS (рис. 6a). Действительно, мутант R51A также демонстрирует значительно сниженное связывание с колонкой гепарина (Таблица 2), предполагая, что он непосредственно способствует связыванию HS.

Связывание HS мешает ингибирующей активности Cst-3 в отношении цистеиновой протеазы

Затем мы попытались получить более функциональное понимание того, как взаимодействие HS / Cst-3 может влиять на ингибирующую активность Cst-3 в отношении цистеиновой протеазы. С этой целью мы измерили активность папаина с использованием пептидного субстрата в присутствии комплекса апо Cst-3 или Cst-3 / HS. Интересно, что мы обнаружили, что Cst-3, связанный с гепарином / HS, значительно нарушает ингибирование папаина, демонстрируя снижение ингибирования примерно на 80% по сравнению с апо Cst-3 (рис.7а). Заинтригованные этим наблюдением, мы повторили эксперимент, используя денатурированный нагреванием BSA в качестве альтернативного субстрата для папаина. Мы снова обнаружили, что в присутствии гексасахарида HS Cst-3 значительно снижает ингибирование папаина. В совокупности наши данные убедительно свидетельствуют о том, что при кислом pH HS способен регулировать ингибирующую способность Cst-3.

a Ферментативную активность папаина определяли с использованием колориметрического пептидного субстрата в присутствии или в отсутствие Cst-3 и в присутствии или в отсутствие гексасахарида HS (6-мерного) и гепарина (Hp). n = 4. b Денатурированный нагреванием BSA расщепляли папаином в присутствии или в отсутствие Cst-3 и / или в присутствии или отсутствии HS 6mer. Дорожку N.Ctrl использовали только с денатурированным BSA. Данные представляют как минимум три подобных эксперимента.

Cst-3 связывает внеклеточный HS в костной ткани мышей

Чтобы понять физиологическое значение взаимодействий Cst-3 / HS, мы исследовали паттерн экспрессии Cst-3 в срезах бедренной кости мыши в коленном суставе с помощью иммуногистохимии.В соответствии с предыдущим отчетом ²⁰ , Cst-3 высоко экспрессируется многими типами костных клеток, включая остеокласты, остеобласты, хондроциты и подмножество клеток / лейкоцитов костного мозга (рис. 8a, темно-коричневое окрашивание; рис. 8b показывает отрицательный результат). контроль). Кроме того, окрашивание Cst-3 также было обнаружено в хряще пластинки роста и вновь образованном костном матриксе под пластиной роста (диффузное коричневое окрашивание). Интересно, что внеклеточное окрашивание Cst-3, по-видимому, более интенсивно вокруг многоядерных остеокластов, что отвечает за резорбцию костного матрикса (рис.8а, области обведены красной пунктирной линией). Поскольку остеокласты способны снижать pH окружающего костного матрикса значительно ниже pH 5 для облегчения декальцификации и деградации кости, мы предположили, что окрашивание костного матрикса на Cst-3 в этих областях могло быть связано с связыванием Cst-3 с внеклеточными тканями. HS. Чтобы проверить эту гипотезу, мы обработали выбранные срезы бедренной кости гепарином при pH 5,5 перед окрашиванием антителом против Cst-3. Примечательно, что мы обнаружили, что окрашивание костного матрикса Cst-3 было заметно снижено вокруг остеокластов (рис.8c – d), что предполагает, что растворимый гепарин способен конкурировать с HS внеклеточного матрикса за связывание Cts-3. Напротив, окрашивание цитоплазмы остеокластов, хондроцитов и остеобластов в значительной степени не изменилось после предварительной обработки гепарином при кислом pH, что позволяет предположить, что лечение гепарином не влияет на иммуноокрашивание Cst-3 неспецифически. Наши данные убедительно свидетельствуют о том, что Cst-3 способен связываться с внеклеточными HS в костном матриксе, в частности, в областях с низким pH, окружающих остеокласты. Это взаимодействие может потенциально регулировать физиологические функции Cst-3 в поддержании тонкого баланса между резорбцией и формированием кости, например, ингибирование активности катепсина K, основной коллагеназы, ответственной за деградацию костного матрикса.8: Cst-3 связывает внеклеточный матрикс HS в костной ткани мыши.

Мышиные срезы бедренной кости иммуно окрашивали либо козьим поликлональным антителом против Cst-3 мыши ( a ), либо контрольным козьим IgG ( b ). Остеокласты обозначены красными стрелками, хондроциты — зелеными треугольниками, а остеобласты — синими стрелками. Кость B, костный мозг BM, пластина для выращивания GP. Увеличение = × 200. c , d Два последовательных среза кости предварительно обрабатывали только ацетатным буфером с pH 5,5 ( c ) или вместе с гепарином ( d ) перед иммуноокрашиванием антимышиным Cst-3.Красные пунктирные линии окружают внеклеточное окрашивание Cst-3, чувствительного к лечению гепарином. Увеличение = × 400. Масштаб = 15 мкм.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Изучение пути биосинтеза гликопротеинов, связанных с аспарагином

Аннотация

Описание

Отдел

Издатель

Массачусетский технологический институт

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.